新型二代CEA嵌合抗原受体慢病毒表达载体的构建与鉴定

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主要英文缩略词表

1 背景介绍

2 材料与方法

2.1.1 细胞系

2.1.2 试验试剂及重要抗体

2.1.3 主要仪器

2.1.4 主要溶液配制

2.1.5 载体

2.2 方法与步骤

2.2.1 CAR 基因序列设计

2.2.2 获得 Hinge-TM-CD28-CD3ζ 基因序列

2.2.2 获得 C2-45 基因序列

2.2.4 制备线性化载体 pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP-T2A-Puro（8189bp）

2.2.5 嵌合抗原受体 C2-45/CAR 与线性化载体的拼接

2.2.6 转化

2.2.7 菌落 PCR 鉴定

2.2.8 重组慢病毒载体测序检定

2.3 慢病毒制备及病毒梯度测定（九睿生物慢病毒包装试剂盒）

2.3.1 慢病毒的制备

2.3.2 病毒梯度测定的测定（逐孔稀释滴度测定法）

2.4 Western blot 检测 293T 细胞中 C2-45/CAR 表达情况

2.4.1 细胞总蛋白提取

2.4.2 BCA 法测定蛋白含量

2.4.3 Western blot

3 结果

3.1 嵌合抗原受体 C2-45/CAR 结构设计

3.2 pCDH-C2-45/CAR 载体构建与鉴定

3.3 重组慢病毒载体的构建

3.4 重组载体 pCDH-C2-45/CAR 的表达

4 讨论

5 结论

参考文献

综述:CEA-CAR在消化系统肿瘤治疗中的研究进展

参考文献

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致 谢