青蒿琥酯对高危MDS细胞株SKM-1中DNMT1表达的影响

摘要

目的 以骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)细胞系SKM-1细胞为研究对象,在体外观察青蒿琥酯(artesunate,ART)对SKM-1细胞脱氧核糖核酸甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT1)基因表达的影响,以期为临床应用ART治疗中高危MDS患者提供体外实验的理论依据.方法 ART干预体外细胞培养MDS细胞SKM-1细胞系,采用逆转录聚合酶链反应(revers transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法观察DNMT1的mRNA改变,采用蛋白印迹法观察DNMT1蛋白表达改变.采用实时定量RT-PCR法观察DNMT1靶基因p15INK4b表达的改变,采用甲基化PCR法观察p15INK4b启动子甲基化的改变.结果 1、5、10tmol/L的ART处理SKM-1细胞后DNMT1基因表达低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).1、5、10μmol/L各剂量组间差异无统计学意义(P＞0.05).DNMT1蛋白表达1、10 μmol/L低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);1、10 μmol/L组低于5 μmol/L组,差异有统计学意义(P＜0.05);ART处理SKM-1细胞后DNMT1基因3、6、12h处理组低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);3 h、6h与12h差异有统计学意义(P＜0.05).DNMT1蛋白3、6、12 h处理组低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).ART处理后p15INK4b的mRNA水平5、10 μmol/L组、地西他宾组高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).p15INK4b的mRNA水平在10μmol/L组是这5个处理组中最高的,并且1μmol/L、5 μmol/L、地西他宾组与10 μmol/L组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);ART处理SKM-1细胞后DNMT1蛋白靶基因p15INK4b启动子甲基化程度下降,各组差异无统计学意义;ART组非甲基化启动子较其他2组上升,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ART通过抑制DNMT1的转录和蛋白表达来恢复SKM-1细胞中的p15INK4b的表达,进而发挥其抑癌作用.