乐伐替尼诱导肝癌耐药细胞株的构建及其生物学特性探析

摘要

目的:构建乐伐替尼诱导的原发性肝细胞癌(HCC)SMMC-7721耐药细胞株,并探讨其生物学特性.方法:选取HCC细胞株SMMC-7721进行培养传代,采用药物逐步递增法建立体外乐伐替尼诱导的SMMC-7721耐药细胞株(耐药组),以未经处理的肝癌细胞为对照组;采用CCK-8法检测乐伐替尼、阿霉素、氟尿嘧啶和顺铂对两组细胞的半数抑制浓度(IC50),并计算乐伐替尼耐药指数(RI);采用Real time-PCR检测两组细胞耐药基因MDR1、LRP、MRP2、GST-pi、TopoⅡɑ和BCRP的表达,采用Western blot检测两组细胞P-gp、LRP、MRP2、GST-pi、TopoⅡɑ和BCRP蛋白的表达.结果:乐伐替尼对对照组和耐药组SMMC-7721细胞IC50分别为(0.15±0.03)μmol/L和(4.34±0.12)μmol/L,RI为28;阿霉素、氟尿嘧啶和顺铂对耐药组SMMC-7721细胞的IC50较对照组降低(P<0.05);耐药组SMMC-7721细胞中MDR1、LRP、MRP2、GST-pi、TopoⅡɑ及BCRP耐药基因的相对表达量均较对照组下降(P<0.05或P<0.01),耐药组SMMC-7721细胞中P-gp、LRP、MRP2、GST-pi、TopoⅡɑ及BCRP蛋白表达均较对照组降低(P<0.05).结论:实验成功诱导获得耐乐伐替尼的体外肝癌SMMC-7721细胞株,该细胞株对阿霉素、氟尿嘧啶和顺铂的敏感性增高,其体制可能与耐药基因MDR1、LRP、MRP2、GST-pi、TopoⅡɑ及BCRP表达降低有关.