乐伐替尼与瑞格菲尼对肝癌细胞PD-L1的作用及机制

摘要

目的:探究乐伐替尼与瑞格菲尼在肝癌细胞中对程序性细胞死亡配体1(PD-L1)作用的分子机制。方法:取人肝癌Hep3B、SMMC-7721细胞,分别转染转化生长因子-β1(TGF-β1)空载体、干扰质粒后的肝癌细胞培养,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF 1α)、髓细胞增生原癌基因(MYC)、缺氧诱导因子-2α(HIF 2α)、信号传导与转录激活因子3(STAT 3)、黏蛋白1-C(MUC 1-C)、细胞周期素依赖蛋白激酶5(CDK 5)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK 14)、表皮生长因子受体(EGFR)、间变性淋巴瘤激酶(ALK)及TGF-β1的mRNA表达,采用Western blot实验检测各组肝癌细胞中PD-L1和TGF-β1的蛋白表达量;取4周龄雌性裸鼠(BALB/c)小鼠30只,人肝癌Hep3B细胞皮下接种于小鼠右侧腹肋下,1周后将皮下成瘤的小鼠随机均分为对照组(DMSO)、乐伐替尼组(注射乐伐替尼)及瑞格菲尼组(注射瑞格菲尼),于末次给药后24 h处死小鼠,采用Western blot实验检测各组小鼠皮下瘤组织PD-L1和TGF-β1的蛋白表达量。结果:与对照组比较,乐伐替尼组和瑞格菲尼组小鼠皮下肝癌移植瘤组织中HIF 1α、MYC、HIF 2α及MUC 1-C mRNA表达均上调,STAT 3、CDK 5、MAPK14、EGFR及ALK mRNA表达均下调,但乐伐替尼组TGF-β1 mRNA表达增加,瑞格菲尼组TGF-β1 mRNA表达降低(P<0.05);与对照组比较,乐伐替尼组肝癌细胞Hep3B和SMMC-7721的TGF-β1 mRNA、PD-L1和TGF-β1蛋白表达均上升,瑞格菲尼组的TGF-β1 mRNA、PD-L1及TGF-β1蛋白表达均下降(P<0.05);肝癌细胞Hep3B和SMMC-7721干扰组TGF-β1 mRNA、PD-L 1 mRNA、TGF-β1及PD-L1蛋白表达分别较对照组降低(P<0.05)。结论:乐伐替尼使肝癌细胞PD-L 1表达上调,瑞格菲尼使PD-L 1表达下调,其机制可能是通过影响TGF-β1的表达。