靶向抑制Akt对成骨细胞分化PI3K/Akt信号通路调控的研究

摘要

目的:观察蛋白激酶B(Akt)特异性抑制剂MK2206对成骨细胞分化的影响,探讨PI3K/Akt信号通路影响成骨细胞分化的分子机制.方法:通过CCK-8检测MK2206对骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖的最大安全浓度;将BMSC分为两组,其中对照组使用OBM诱导处理,干预组加入含有3μmol/L的MK2206的OBM进行诱导处理,检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性和矿化能力,实时荧光定量PCR(qPCR)检测相关基因的表达水平.将细胞分为3组,其中OBM组仅加入成骨细胞诱导培养基培养;OBM+MK2206组使用含有3 μmol/L MK2206的OBM培养;MK2206组中使用含有3 μmol/L MK2206的普通培养基处理,采用Western blotting检测相关蛋白的表达情况.结果:CCK-8结果提示,在3.2 μmol/L及以下浓度MK2206对BMSC的增殖没有影响;随着浓度的升高,ALP阳性的细胞数量逐渐下降;干预组的ALP表达、细胞外基质矿化能力、ALPmRNA和骨钙素(OCN)mRNA表达较对照组均明显减少(均P<0.05);与OBM组比较,OBM+MK2206组和MK2206组细胞中RUNX2、CollagenⅠ和p-Akt蛋白均出现明显的降低,且MK2206组下降更加明显(均P<0.05).结论:靶向抑制Akt在体外细胞培养中可通过PI3K/Akt信号通路明显下调成骨细胞相关基因ALP和OCN的表达,并抑制成骨细胞的分化成熟.