亚麻SRAP-PCR反应体系的优化建立及多态性标记筛选

摘要

以亚麻叶片DNA为模板,以Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物和Taq DNA聚合酶进行4因素3水平正交试验设计,对亚麻SRAP反应体系进行优化,并比较了不同浓度模板DNA对扩增效果的影响,建立了亚麻的SRAP最佳反应体系.结果表明:亚麻SRAP-PCR最佳反应体系为2.5 μL 10×Loading buffer、Mg2+浓度3.0 mmol/L、dNTPs浓度0.25 mmol/L、引物浓度0.2μmol/L、Taq DNA聚合酶1.0U、模板DNA 75 ng,总体积为25μL.各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以Mg2+浓度影响最大,Taq DNA聚合酶的影响最小.运用该体系对15份不同来源亚麻品种进行验证,证明该体系稳定可靠,并从169个SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的引物组合21个.