PTEN基因真核表达载体重组质粒的构建及序列测定

摘要

目的构建编码肿瘤抑制基因PTEN的正义与反义真核表达重组载体并进行其序列测定.方法新鲜胎盘组织抽提基因组RNA;根据基因库PTEN基因序列分别设计合成三对反义引物及一对正义引物,采用RT-PCR法扩增编码PTEN的基因片段;将PTEN基因定向克隆到pcDNA3.1/Hygro(一)真核表达载体,筛选阳性重组子并鉴定;对重组子进行序列测定.结果RT-PCR所扩增的PTEN基因片段为241,239,227 bp(反义)及1209 bp(正义),表明所克隆的基因为编码PTEN的基因片段.结论成功构建编码肿瘤抑制基因PTEN的pcDNA3.1/Hygro(一)真核表达质粒pcDNA3.1/Hygro(一)PTEN.