人Heparanase基因真核和原核表达载体的构建及融合蛋白的表达

摘要

目的: 构建人Heparanase基因的真核、原核表达载体,大肠杆菌表达其融合蛋白. 方法: 采用反转录-聚合酶链反应从人肝癌细胞株HepG2 cDNA中,分别扩增出Heparanase编码基因,用限制性内切酶BamHI消化后,插入真核表达载体pcDNA3.1中,经酶切鉴定与测序证实后,连接成包括完整的人Heparanase基因ORF区的真核表达载体. 以亚克隆法构建于原核表达载体pRSET的相应酶切位点,转化大肠杆菌BL21菌株,异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生融合蛋白. 结果: 构建的人Heparanase基因表达载体经序列测定证实, 与GenBank登录结果完全一致;双酶切鉴定证实,克隆基因正确插入载体pcDNA3.1及pRSET;SDS-PAGE证实融合蛋白表达成功. 结论: 成功构建了人Heparanase基因真核、原核表达载体,成功正确表达了6His/Heparanase融合蛋白.