高效液相色谱-荧光检测法测定发酵红肉制品中Neu5Gc

摘要

基于高效液相色谱-荧光检测(HPLC-FLD)技术,建立红肉发酵及制品中N-羟乙酰神经氨酸(N-glycolylneuraminic acid,Neu5Gc)的定量分析方法.成功搭建了以酸水解释放试样中的Neu5Gc,4,5-亚甲二氧基-1,2-邻苯二胺盐(4,5-methylenedioxy-1,2-phenylenediamine dihydrochloride,DMB)为衍生化试剂,并采用安捷伦ZORBAX Eclipse XDB-C 18色谱柱等系列条件的HPLC-FLD分析检测方法.该方法经验证:Neu5Gc在25～400 μmol/L范围内与Neu5Gc峰面积的线性关系良好,R2=0.999 41;样品加标平均回收率在96.4％～99.07％之间;RSD为1.2％,重复性的RSD为1.5％;仪器检出限为0.001μmol/L,定量限为0.003 μmol/L.检测发酵红肉样品中Neu5Gc的质量分数在9.59～20.08 μg/g之间,不同的发酵红肉制品Neu5Gc的含量之间均存在显著性差异(p＜0.05).本方法能有效分离Neu5Gc目标峰(分离度R＞1.5)、操作简单、重复性好、灵敏度和精密度高,可广泛用于发酵红肉制品中Neu5Gc的定量测定.