梯型熔解温度等温扩增检测食品中植物源成分的内标方法构建

摘要

目的 为梯型熔解温度核酸等温扩增(ladder-type melting temperature isothermal amplification,LMTIA)检测食品中植物源特异性基因建立内标方法,并用于检测肉制品中植物成分.方法 针对植物转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)的共有序列,设计LMTIA引物,优化反应温度,考查方法灵敏度,并评估淀粉制品、蜂蜜、食用油DNA提取方法与LMTIA检测方法的适应性,以H2O、鸭肉、鸡肉、羊肉、猪肉和牛肉基因组为阴性对照测试LMTIA方法的假阳性.结果 所建立的LMTIA方法在最优温度57 °C时,灵敏度为10 pg/μL玉米基因组与10 pg/μL红枣基因组,可检出肉制品掺入0.1％的玉米淀粉,所选淀粉制品、蜂蜜、食用油DNA提取方法均适用于LMTIA检测,并且所有阴性对照样品在测试中均未出现假阳性.结论 本研究成功建立了LMTIA检测食品中植物源特异性基因的内标方法,排除了DNA提取引起的LMTIA检测的假阴性,可用于肉制品中植物成分定性检测.