中华鳖Gper基因克隆、表达及其在精巢中的功能

摘要

G蛋白偶联雌激素受体(Gper)是一种膜雌激素受体,介导雌激素的非基因组途径.为研究G蛋白偶联雌激素受体基因(Gper)在中华鳖(Pelodiscus sinensis)性腺分化和精巢中的作用,本研究利用RACE法克隆了中华鳖Gper cDNA全长序列,利用qRT-PCR分析其在不同组织及胚胎不同发育阶段的性腺中的表达模式,并通过来曲唑(letrozole)和Gper抑制剂G-15处理雄鳖初步分析Gper在精巢中的作用.结果 显示,中华鳖Gper cDNA序列全长2023 bp,包含705 bp 5'非编码区、241 bp 3'非编码区和1077 bp开放阅读框,编码358个氨基酸,其氨基酸序列上有7个跨膜结构域和Asp-Arg-Tyr (DRY)三联体结构,基因编码蛋白分子量为41.084 kD,等电点为6.844.Gper基因在各组织均有表达,其中脑中表达量最高,其次为卵巢;不同孵化温度条件下,性腺分化关键时期的Gper表达量变化呈相同趋势:16期表达量最高,随着性腺分化过程表达量显著降低.Letrozole处理组中Gper表达量显著降低,G-15处理组Esr1和Esr2表达量明显升高;G-15处理组精巢中,精子发生与促细胞凋亡相关基因表达量显著升高.结果 表明,Gper可能参与中华鳖性腺分化早期过程,并调控雄性生殖细胞增殖.