中华鳖Cyp19a1、Sf-1和Gper基因克隆、表达及精巢中雌激素作用研究

目录

第一章 文献综述

1.1 中华鳖物种简介

1.2 性别分化机制研究

1.3 芳香化酶与Cyp19基因

1.4 芳香化酶转录因子研究

1.4.1 cAMP应答元件

1.4.2类固醇合成因子Sf-1

1.4.3 Foxl2 基因

1.4.4 Dmrt1 基因

1.5 雌激素在精巢中的研究

1.5.1 雌激素受体在精巢中的研究

1.5.2 芳香化酶在精巢中的研究

1.6 本研究的内容和意义

第二章 中华鳖Cyp19a1、Sf-1 和Gper 基因克隆与表达

2.1 实验材料

2.1.1 中华鳖材料

2.1.2 实验所需仪器及试剂

2.2 实验方法

2.2.1 引物设计

2.2.2 中华鳖总RNA的提取

2.2.3 中华鳖Cyp19a1、Sf-1和Gper基因中间片段克隆

2.2.4 中华鳖Cyp19a1、Sf-1和Gper基因的3' UTR克隆

2.2.5 中华鳖Cyp19a1 、Sf-1和Gper基因的5' UTR克隆

2.2.6 胶回收

2.2.7 连接

2.2.8 转化和蓝白斑筛选阳性单克隆

2.2.9 序列拼接和分析

2.2.10 Cyp19a1、 Sf-1和Gper基因在中华鳖不同组织中的表达

2.3 实验结果

2.3.1 总RNA提取

2.3.2 中华鳖Cyp19a1 、Sf-1和Gper基因cDNA片段的克隆

2.3.3 中华鳖Cyp19a1、Sf-1和Gper 序列拼接及生物信息学分析

2.3.4 中华鳖Cyp19a1、Sf-1和Gper 氨基酸序列分析

2.3.5 中华鳖Cyp19a1、Sf-1和Gper基因氨基酸同源性分析及系统发育树的构建

2.3.6 中华鳖Cyp19a1、Sf-1和Gper基因的组织特异性表达及胚胎不同发育阶段表达

2.4 讨论

2.4.1 Cyp19a1克隆与表达分析

2.4.2 Sf-1克隆与表达分析

2.4.3 Gper克隆与表达分析

第三章 中华鳖Cyp19a1 和Sf-1 多克隆抗体的制备

3.1 实验材料

3.2 主要试剂和仪器

3.3 实验方法

3.3.1 引物设计

3.3.2 目的片段的扩增、双酶切及连接反应

3.3.3 BL21（DE3）转化及诱导

3.3.4 SDS-PAGE电泳

3.3.5 重组蛋白纯化

3.3.6 重组蛋白透析

3.3.7 重组蛋白特异性检测

3.3.8 多克隆抗体的制备

3.3.9 鼠抗多克隆抗体效价检测

3.3.10 免疫组化实验

3.4 实验结果

3.4.1 中华鳖Cyp19a1和Sf-1基因抗原决定簇片段的克隆

3.4.2 重组表达质粒的酶切及测序鉴定

3.4.3 融合蛋白的表达和纯化

3.4.4 目的蛋白Western blot鉴定

3.4.5 抗体血清效价的检测

3.4.6 免疫组化实验

3.5 讨论

第四章 来曲唑处理对中华鳖精巢的影响

4.1 材料与方法

4.1.1 实验材料

4.1.2 主要试剂

4.1.3 实验方法

4.2 实验结果

4.2.1 来曲唑处理对中华鳖精巢形态学的影响

4.2.2 来曲唑处理对中华鳖精巢中部分基因的影响

4.2.3 荧光TUNEL 结果分析

4.3 讨论

总 结

参考文献

附 录

致 谢

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