溶藻弧菌全菌可溶性蛋白二维图谱的建立及部分蛋白分子的鉴定

摘要

本研究采用蛋白质组学技术,建立了溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)ZJ03培养至稳定期的蛋白质组双向电泳图谱,并对部分蛋白分子进行了肽质量指纹图谱分析鉴定.首先将溶藻弧菌接种子TSB培养基28℃培养24 h,利用裂解液裂解细菌,提取全菌可溶性蛋白,荧光染料标记,24cm pH4～7的胶条进行等电聚焦,再用12.5%的胶进行SDS-PAGE.2-D胶经过分析,得到902±8个蛋白斑点,重复胶的匹配点数为866±28,匹配率为96%.从双向电泳图谱中选取68个高丰度蛋白质点进行肽质量指纹图谱鉴定,其中60个在NMPDR数据库中得到鉴定,另外8个在NCBI数据库中得到鉴定.鉴定的蛋白中发现Serine protein kinase、purine nucleoside phosphorylase和Alkyl hydropemxide reductase subunit C-like protein存在修饰现象,它们在胶上均有2种表现形式.对68个蛋白进行了细胞功能的分类,发现能量代谢蛋白最多,占43%;其次是转运和结合蛋白,占9%;第三是外膜蛋白,占8%.经CMR操纵子预测软件分析预测到2个操纵子,它们均参与了能量代谢过程.研究结果为溶藻弧菌在不同生长条件下的比较蛋白质组学以及该菌强毒株和无毒株的比较研究提供了基础资料.