罗非鱼肝脏中超氧化物歧化酶的提取、纯化与分析

摘要

以奥尼罗非鱼肝脏为原料,研究加热法提取超氧化物歧化酶(SOD)的工艺条件,丙酮沉淀回收酶法和HitrapTM Q FF阴离子柱纯化Cu,Zn-SOD,并对其酶学性质进行分析.结果表明加热法提取SOD时,在缓冲液中加入10 mmol·L-1CuCl2,调节pH为5.6,65 ℃进行加热处理,可以提高SOD粗酶的稳定性和得率,其得率为57%,粗酶比活为(2580±6) U·mg-1.对酶的酶学性质研究表明纯化后SOD比活为(4895±2) U·mg-1, SDS-PAGE电泳为单一蛋白酶带,分子量为36 ku,最大紫外吸收波长为265 nm.该酶在pH 6.0～9.0具有较好的稳定性,在75 ℃以下稳定,具有较好的耐热性.氰化钾、脲素、β-巯基乙醇、H2O2、对Cu,Zn-SOD具有明显的抑制作用;EDTA浓度小于3 mmol·L-1时,对Cu,Zn-SOD活性有明显增强作用,EDTA浓度大于3 mmol·L-1时,对Cu,Zn-SOD活性有抑制作用;DTT的修饰使Cu,Zn-SOD活性显著增加.为进一步研究和应用罗非鱼肝脏SOD提供了基础参数.