人骨形态发生蛋白2重组腺病毒载体的构建及其生物学活性检测

摘要

目的 构建人骨形态发生蛋白2(hBMP-2)重组腺病毒载体(Ad-hBMP-2),并检测其转染后的骨髓基质细胞hBMP-2表达以及成骨能力的改变.方法 采用Cre-lox重组方法构建含有hBMP-2基因的复制缺陷型重组腺病毒,并利用原位杂交和免疫组化手段观察转染后的骨髓基质细胞hBMP-2 mRNA和蛋白表达情况;通过Ⅰ型胶原原位杂交、碱性磷酸酶测定、透射电镜观察以及裸鼠肌袋试验评价Ad-hBMP-2转染对兔骨髓基质细胞成骨能力的影响.结果 病毒培养上清液的聚合酶链式反应证实构建的重组腺病毒含有Ad-hBMP-2基因,重组腺病毒滴度达3.8×1010pfu/L;感染增殖率为100的Ad-hBMP-2转染兔骨髓基质细胞24 h和48 h后即可分别检测到显著的hBMP-2 mRNA和蛋白表达,转染效率几乎达100%;Ad-hBMP-2转染可以明显刺激兔骨髓基质细胞Ⅰ型胶原mRNA表达、碱性磷酸酶分泌、细胞内蛋白质合成以及异位骨形成等.结论 Ad-hBMP-2具有高效转染能力,并能够诱导骨髓基质细胞向成骨细胞转化,进而促进骨形成.