猪细小病毒7型cap蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

摘要

[目的]为后续研发最新型PPV疫苗,控制猪细小病毒传染性,以及建立ELISA检测方法鉴定基础.[结果]对已发表的37株完整猪细小病毒7型cap蛋白的核苷酸序列进行比对,将得到的保守序列根据大肠杆菌的偏好进行密码子优化后合成基因,得到全长为1 422 bp的基因,并与原核表达载体pET-32a(+)连接,获得重组质粒pET-32a-cap,经PCR扩增测序鉴定后,将其转化到大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞中,进行IPTG诱导表达及Western blotting鉴定.对获得的重组融合蛋白进行可溶性分析、纯化,免疫BALB/c小鼠和豚鼠制备多克隆抗体.[结论]成功制备了具有免疫原性的cap蛋白及其鼠源多克隆抗体,为猪细小病毒7型cap蛋白生物学功能及相关致病机制研究提供了基础材料.