Cap蛋白

摘要： 为了解进口美国种猪中获取的猪圆环病毒3型(PCV3)毒株全基因组序列及遗传变异情况,根据GenBank中收录的PCV3基因组序列,设计2对特异性引物,对确诊感染PCV3的病死猪组织进行全基因组序列扩增、拼接、测序和序列分析.结果显示,获得的PCV3美国毒株(命名为PCV3_USA2021,GenBank登录号OL799306)全基因组序列长度约为2000 bp,与国内外不同地区的38个PCV3参考毒株同源性为98.7％～99.8％.其中,PCV3_USA2021株开放阅读框ORF1和ORF2与国内外38个参考毒株同源性分别为99.1％～99.9％和98.0％～100％.构建的全基因组系统进化树显示,该毒株为PCV3a亚型,与美国毒株(PCV3-US_SD2016)亲缘关系最近.本研究为PCV3的遗传变异、流行病学分析提供了参考,也为相关疫苗的研制打下了基础.

摘要： 为探究猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白与热休克蛋白DNAJC7的关系,用Cap与DNAJC7蛋白的重组杆状病毒质粒pFast-GST-Cap和pFast-DNAJC7共转染sf9细胞,并用免疫共沉淀试验(Co-IP)检测。结果显示,沉淀Cap蛋白后能检测到DNAJC7蛋白条带,且沉淀DNAJC7蛋白后能够检测到Cap蛋白条带,表明Cap蛋白与DNAJC7蛋白之间存在相互作用。论文完善了PCV2 Cap蛋白参与的复杂分子间相互作用网络,并为阐明DNAJC7蛋白对PCV2复制的影响及机制奠定了基础。

摘要： 为了用家蚕杆状病毒表达系统表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白,将不同株系的PCV2 Cap蛋白基因、人工改造的Cap蛋白突变体基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体,用共转染技术成功构建了重组杆状病毒。将重组杆状病毒感染家蚕,成功获得了大量Cap蛋白的表达产物。结果表明,纯化蛋白主要为病毒空衣壳粒子,推算PCV2空衣壳在家蚕中的表达量可达1.2 mg/蛹~1.6 mg/蛹。电镜观察可见到完整的空衣壳粒子,胶体金标记免疫电镜观察可见到完整的胶体金粒子,金粒大小为10 nm。

摘要： 为了制备猪圆环病毒3型cap蛋白,依据NCBI发表的PCV3全基因序列(MK105924)设计了一对特异性引物,通过PCR方法获取PCV3-CAP蛋白基因,将纯化的PCV3-CAP蛋白基因插入到pET-32a(+)质粒中构建重组质粒pET-32a(+)-PCV3-Cap,将构建成功的质粒转化到表达菌株BL21(DE3),经1mmol/mL的IPTG 37°C诱导表达后,利用SDS-PAGE检测重组蛋白的表达情况,利用Western blot方法分别检测重组蛋白的免疫原性,对影响重组蛋白表达的IPTG浓度和诱导时间进行分析。结果表明:PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳检测发现条带位置正确,重组质粒pET-32a(+)-PCV3-Cap测序正确,含有重组质粒pET-32a(+)-PCV3-Cap的表达菌株BL21(DE3)在诱导表达后,经SDS-PAGE检测证明有重组蛋白表达,重组蛋白主要以Wes TM全自动蛋白表达分析系统结果表明该重组蛋白与PCV3多克隆抗体发生特异性反应,说明成功制备了PCV3 Cap重组蛋白。

摘要： 为了表达猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)Cap蛋白,按照昆虫细胞密码子偏嗜性对ORF2基因进行优化并在N端加上His标签基因,合成的ORF2基因片段克隆入pFastBac Dual杆状病毒穿梭载体;将重组质粒转化大肠杆菌DH10-Bac感受态后通过蓝白斑筛选获得重组杆粒Bacmid-C2;将重组杆粒转染至SF9细胞5 d后收集细胞上清液;连续传代3次观察细胞病变。将接毒后的SF9细胞样通过Western blot及间接免疫荧光(IFA)进行Cap蛋白表达的鉴定。利用蔗糖密度梯度离心对病毒样颗粒的Cap蛋白纯化后进行透射电镜观察。结果显示:SDS-PAGE和Western blot检测发现重组杆状病毒在昆虫细胞中能够有效表达Cap蛋白,且与His-tag单抗及PCV3阳性血清发生特异性反应;IFA进一步鉴定感染了重组病毒的昆虫细胞与His单抗产生特异性荧光;透射电镜可以明显观察到14~17 nm左右形态规则的病毒样颗粒(VLPs)。PCV3 Cap蛋白的成功表达和鉴定将为研究Cap蛋白的免疫原性和空间结构奠定基础,也为探讨开发PCV3的亚单位疫苗提供了可能。

摘要： 为了研究不同免疫增强剂对猪圆环病毒2型衣壳蛋白(PCV2-Cap)免疫效果的影响,本研究将BALB/c小鼠随机分为10组,分别为非免疫对照组(Control组),Cap蛋白免疫对照组(Cap组),佐剂疫苗免疫对照组(15A组),以及佐剂组(IL-2组、Poly I:C组、R848组、QuilA组、QS21组、MPLA组)、商品疫苗免疫对照组(Con-V组),选择6种不同的免疫增强剂(IL-2、PolyI:C、R848、Quil-A、QS21、MPLA)分别与等量PCV2-Cap蛋白(15μg/只)混合制备疫苗,免疫BALB/c小鼠,免疫后定期采血,采用相应试剂盒检测PCV2抗体和细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12水平;免疫28 d,对所有小鼠以0.5 mL/只剂量腹腔注射PCV2 SX-07株(1×106.0TCID50/mL),攻毒后21 d采集全血,利用PCR方法检测PCV2病毒血症。结果显示,各佐剂疫苗免疫后对小鼠存在短暂的刺激,但能快速恢复正常,对小鼠安全性优于对照商品疫苗;抗体检测结果显示,首免后21 d,IL-2组、QuilA组和MPLA组小鼠抗体水平高于其他佐剂组,IL-2组、QuilA组均高于Cap组和15A组,且差异极显著(P0.05);首免后28 d抗体检测结果显示,IL-2组、QuilA组、QS21组和MPLA组小鼠抗体水平高于Con-V组,但差异不显著(P>0.05),且所有佐剂组和Con-V组均高于Cap组,且差异均显著(P<0.05);细胞因子检测结果显示,MPLA组小鼠的IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12等各细胞因子表达水平均显著高于其他组(P<0.05);QS21组TNF-α的表达水平最高;MPLA、QS21、IL-2、R848诱导小鼠特异性细胞免疫的能力高于商品佐剂和商品疫苗;病毒血症检测结果显示,Control组中小鼠PCV2攻毒后均为PCV2病毒血症阳性,Cap蛋白组中33.3%小鼠为阳性,15A组中16.7%为阳性,其他组均为阴性。综合以上研究结果首次表明,在6种选用的增强剂中,MPLA、IL-2和QS21既能够提高PCV2 Cap蛋白疫苗免疫后机体的抗体水平,又能显著提高免疫后的细胞免疫应答水平,为PCV2亚单位疫苗的新型佐剂后期开发和应用奠定实验基础。

摘要： 为建立血清中鹅星状病毒(GoAstV)抗体检测的间接ELISA方法,本研究以GoAstV JX01/China/2021株基因组为模板优化并合成ORF2基因(1 bp~630 bp),构建重组质粒pCold I-Cap,利用原核表达系统表达GoAstV重组Cap蛋白,以NI-NTA亲和层析柱纯化的重组Cap蛋白作为包被抗原,通过优化各反应条件建立了GoAstV间接ELISA抗体检测方法。结果显示重组Cap蛋白的最佳包被浓度为2.5μg/mL,10%马血清37°C封闭90 min,待检血清稀释度为1:50,孵育时间为37°C45 min,兔抗鹅IgG-HRP工作浓度为1:2000,37°C孵育60 min。采用建立的间接ELISA方法对鹅细小病毒(GPV)、鹅圆环病毒(GoCV)、禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)、坦布苏病毒(TMUV)、鹅呼肠孤病毒(GRV)、大肠杆菌(E.coli)等鹅源阳性血清进行检测,结果显示仅GoAstV阳性血清为阳性结果,其他病原阳性血清检测结果均为阴性,特异性较强;将GoAstV阳性血清2倍倍比稀释后,利用本实验建立的GoAstV间接ELISA抗体检测方法及病毒中和试验方法同时检测,结果显示该方法的检测下限为1:400,而病毒中和试验的检测下限为1:200,表明该方法的敏感性较高;重复性试验结果显示,批内、批间变异系数均小于10%,重复性较好。利用本实验建立的方法与病毒中和试验同时检测120份鹅血清,结果显示二者的符合率为94.2%,Kappa系数为0.868,表明两种方法一致性良好。利用本研究建立的间接ELISA方法对670份采自江西及周边省份的鹅血清样品进行检测,GoAstV的检出率为32.0%(214/670)。本研究建立的检测GoAstV血清抗体的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可为GoAstV感染的诊断及流行病学调查提供切实可行的方法。

摘要： 为了解猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)在浙江地区的流行病学特点和遗传变异规律,本研究采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)对2016—2020年采自浙江省不同地区猪场的1725份疑似猪圆环病毒2型感染的临床病料进行PCV2的病原学检测,同时对部分阳性样品进行全基因组扩增、克隆和测序,并与GenBank中收录的16株参考株序列进行比对和遗传进化分析。结果表明:PCV2检测阳性的样品有359份,平均阳性率为20.8%,2016—2020年PCV2阳性率分别为38.1%、23.2%、24.1%、12.5%和10.7%;测序所得PCV236个全基因序列的核苷酸同源性为94.0%~99.9%,与国产疫苗株核苷酸同源性为94.7%~98.5%,与参考株核苷酸同源性为92.9%~99.8%;遗传进化分析显示PCV236个全基因序列可分为3个基因型,其中11株为PCV2a型,8株为PCV2b型,17株为PCV2d型,PCV2d为优势基因型;ORF2基因全长分别为705 bp(16株)和702 bp(20株),相互间核苷酸同源性为88.7%~100.0%,与国产疫苗株核苷酸同源性为90.2%~99.6%,与参考株核苷酸同源性为85.0%~100.0%。Cap蛋白的氨基酸序列分析表明,36株序列除了唯一糖基化位点呈高度保守外,存在较多的点突变,且不同基因型具有其代表性突变位点,优势基因型PCV2d的特异性突变位点主要集中在I53、N68、L89、T121、R168、I215。本研究为浙江地区PCV2的免疫预防提供了参考,为新型疫苗的研制积累了有效材料。

摘要： 为了制备盖他病毒(Getah virus,GETV)结构蛋白Cap和E2的多克隆抗体,将Cap和E2克隆到原核表达载体pET-32a中,然后将构建的表达质粒pET-32a-Cap/E2转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导蛋白表达,非变性条件下用Ni-NTA琼脂糖树脂纯化重组pET-32a-Cap/E2蛋白。用纯化的重组蛋白多次接种新西兰大白兔,从而制备多克隆抗体,后续进行效价测定、Western blot与间接免疫荧光试验(IFA)验证抗体与病毒蛋白的反应。结果表明,Western blot与IFA显示制备的兔多克隆抗体能够与GETV抗原特异性结合;效价测定表明了制备的兔多克隆抗体Cap和E2效价均可达到1∶64000。研究制备的多克隆抗体特异性良好,为GETV检测制剂的研发提供了良好的生物材料,为GETV蛋白功能的研究奠定了基础。

摘要： 【目的】利用大肠杆菌原核表达系统表达猪圆环病毒2型Cap蛋白及在其C-端嵌合PRRSV T细胞抗原表位的Cap嵌合蛋白,对Cap蛋白形成的病毒样颗粒(VLPs)的稳定性、免疫原性以及C-端嵌合PRRSV T细胞抗原表位VLPs的热稳定性进行研究,为猪圆环病毒2型(PCV2)VLPs疫苗的高效制备及基于Cap VLPs纳米骨架展示技术嵌合疫苗的开发奠定基础。【方法】采用分子生物学方法合成PCV2b型强毒株ZJ的cap基因,在其C-端插入PRRSV T细胞抗原表位T1、T2、T3、T4、T5,构建cap-T1~cap-T5基因;将cap及cap-T1~cap-T5基因与pET28a表达载体连接,构建重组表达载体,转染大肠杆菌ClearColi TM BL21(DE3)进行诱导表达,并对表达产物的热稳定性及免疫效果进行检测。【结果】实现了Cap蛋白及其C-端嵌合PRRSV T细胞抗原表位的Cap-T1、Cap-T2、Cap-T3、Cap-T4和Cap-T5嵌合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达,并成功观察到了VLPs;表达产物热稳定性分析显示,在60°C处理30 min条件下,Cap VLPs保持稳定,而C-端嵌合PRRSV T细胞抗原表位的VLPs热稳定性大幅下降;小鼠免疫效果检测显示,Cap VLPs诱导产生了高水平特异性抗体,其中VLPs+佐剂S350组效果最好。【结论】利用大肠杆菌表达系统表达的PCV2 Cap蛋白可高效自组装成耐热和高免疫原性的VLPs,但在Cap蛋白C-端嵌合PRRSV T细胞抗原表位后的嵌合VLPs组装效果和稳定性急剧下降,提示PCV2 VLPs作为纳米骨架用于传染病疫苗研发仍有较大局限性。

摘要： 猪圆环病毒一直是21世纪以来危害养猪业的重要病毒,其临床主要症状表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征、呼吸道和肠道疾病、繁殖障碍、猪皮炎和肾病综合征(PDNS).PCV2感染率一直居高不下,虽然各种PCV2疫苗在临床上的使用,很大程度的控制了该病的发生,但是2016年美国学者报道了不同基因型的圆环病毒,并命名为PCV3,且研究发现PCV3感染多见于具有PDNS和繁殖障碍症状猪群.随后在美国各地的农场均有检测出PCV3,可见该病已于美国各地区普遍流行.紧接着在我国安徽、重庆、福建、河北、河南、山东、湖南、江苏、江西、广西、广东、辽宁和浙江等地均检测出了PCV3,同时韩国、巴西和波兰学者也相继报道了PCV3阳性的猪群.这一新发病毒也将使得与圆环病毒相关的疾病在我国进一步蔓延,严重影响猪群的健康与生长发育,为养猪业带来重大的经济损失.目前还没有在体外成功分离出该病毒的报道,这为疫苗的研究和该病的预防带来了很大的困难.然而PCV3和PCV2的Cap蛋白的同源性表现出很大的差异,新的疫苗研发迫在眉睫.

摘要： 猪圆环病毒一直是21世纪以来危害养猪业的重要病毒,其临床主要症状表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征、呼吸道和肠道疾病、繁殖障碍、猪皮炎和肾病综合征(PDNS).PCV2感染率一直居高不下,虽然各种PCV2疫苗在临床上的使用,很大程度的控制了该病的发生,但是2016年美国学者报道了不同基因型的圆环病毒,并命名为PCV3,且研究发现PCV3感染多见于具有PDNS和繁殖障碍症状猪群.随后在美国各地的农场均有检测出PCV3,可见该病已于美国各地区普遍流行.紧接着在我国安徽、重庆、福建、河北、河南、山东、湖南、江苏、江西、广西、广东、辽宁和浙江等地均检测出了PCV3,同时韩国、巴西和波兰学者也相继报道了PCV3阳性的猪群.这一新发病毒也将使得与圆环病毒相关的疾病在我国进一步蔓延,严重影响猪群的健康与生长发育,为养猪业带来重大的经济损失.目前还没有在体外成功分离出该病毒的报道,这为疫苗的研究和该病的预防带来了很大的困难.然而PCV3和PCV2的Cap蛋白的同源性表现出很大的差异,新的疫苗研发迫在眉睫.

摘要： 猪圆环病毒一直是21世纪以来危害养猪业的重要病毒,其临床主要症状表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征、呼吸道和肠道疾病、繁殖障碍、猪皮炎和肾病综合征(PDNS).PCV2感染率一直居高不下,虽然各种PCV2疫苗在临床上的使用,很大程度的控制了该病的发生,但是2016年美国学者报道了不同基因型的圆环病毒,并命名为PCV3,且研究发现PCV3感染多见于具有PDNS和繁殖障碍症状猪群.随后在美国各地的农场均有检测出PCV3,可见该病已于美国各地区普遍流行.紧接着在我国安徽、重庆、福建、河北、河南、山东、湖南、江苏、江西、广西、广东、辽宁和浙江等地均检测出了PCV3,同时韩国、巴西和波兰学者也相继报道了PCV3阳性的猪群.这一新发病毒也将使得与圆环病毒相关的疾病在我国进一步蔓延,严重影响猪群的健康与生长发育,为养猪业带来重大的经济损失.目前还没有在体外成功分离出该病毒的报道,这为疫苗的研究和该病的预防带来了很大的困难.然而PCV3和PCV2的Cap蛋白的同源性表现出很大的差异,新的疫苗研发迫在眉睫.

摘要： 近年来猪圆环病毒3型的感染逐年增多,研制有效的防控疫苗有利于对该病的防控.基于PCV3的结构蛋白(Capsid)能在体外自组装成病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)的特性,选用不同的启动子,构建了分泌性表达PCV3Cap蛋白的酿酒酵母表达系统,通过影响缺陷培养筛选,获得了重组表达菌株,并初步研究了其表达特性,这为进一步研制PCV3VLP疫苗奠定了基础.

摘要： 近年来猪圆环病毒3型的感染逐年增多,研制有效的防控疫苗有利于对该病的防控.基于PCV3的结构蛋白(Capsid)能在体外自组装成病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)的特性,选用不同的启动子,构建了分泌性表达PCV3Cap蛋白的酿酒酵母表达系统,通过影响缺陷培养筛选,获得了重组表达菌株,并初步研究了其表达特性,这为进一步研制PCV3VLP疫苗奠定了基础.

摘要： 近年来猪圆环病毒3型的感染逐年增多,研制有效的防控疫苗有利于对该病的防控.基于PCV3的结构蛋白(Capsid)能在体外自组装成病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)的特性,选用不同的启动子,构建了分泌性表达PCV3Cap蛋白的酿酒酵母表达系统,通过影响缺陷培养筛选,获得了重组表达菌株,并初步研究了其表达特性,这为进一步研制PCV3VLP疫苗奠定了基础.

摘要： 为了建立检测PCV2抗体的间接ELISA方法,本研究以猪圆环病毒2型(PCV2)重组Cap蛋白作为包被抗原,优化了反应条件及抗原、抗体工作浓度.结果显示,抗原最佳包被浓度为1μg/mL,待检血清的最佳稀释度为1∶80;最佳封闭液和抗体稀释液为含1％明胶、0.05％Tween-20的0.01M pH7.4PBS;当被检血清的OD450nm值≥0.3时为阳性,当OD值＜0.3时为阴性.该方法与猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、伪狂犬、猪流行性腹泻等病毒抗体无交叉反应,与免疫过氧化物酶单层试验的符合率为98.3％,批内与批间重复性试验的变异系数分别低于5％与8％.应用建立的方法检测了126份2013年采集的猪血清,PCV2抗体阳性率为40％～100％,表明河北省的猪群中PCV2感染率很高.

摘要： 为了建立检测PCV2抗体的间接ELISA方法,本研究以猪圆环病毒2型(PCV2)重组Cap蛋白作为包被抗原,优化了反应条件及抗原、抗体工作浓度.结果显示,抗原最佳包被浓度为1μg/mL,待检血清的最佳稀释度为1∶80;最佳封闭液和抗体稀释液为含1％明胶、0.05％Tween-20的0.01M pH7.4PBS;当被检血清的OD450nm值≥0.3时为阳性,当OD值＜0.3时为阴性.该方法与猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、伪狂犬、猪流行性腹泻等病毒抗体无交叉反应,与免疫过氧化物酶单层试验的符合率为98.3％,批内与批间重复性试验的变异系数分别低于5％与8％.应用建立的方法检测了126份2013年采集的猪血清,PCV2抗体阳性率为40％～100％,表明河北省的猪群中PCV2感染率很高.

摘要： 为了建立检测PCV2抗体的间接ELISA方法,本研究以猪圆环病毒2型(PCV2)重组Cap蛋白作为包被抗原,优化了反应条件及抗原、抗体工作浓度.结果显示,抗原最佳包被浓度为1μg/mL,待检血清的最佳稀释度为1∶80;最佳封闭液和抗体稀释液为含1％明胶、0.05％Tween-20的0.01M pH7.4PBS;当被检血清的OD450nm值≥0.3时为阳性,当OD值＜0.3时为阴性.该方法与猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、伪狂犬、猪流行性腹泻等病毒抗体无交叉反应,与免疫过氧化物酶单层试验的符合率为98.3％,批内与批间重复性试验的变异系数分别低于5％与8％.应用建立的方法检测了126份2013年采集的猪血清,PCV2抗体阳性率为40％～100％,表明河北省的猪群中PCV2感染率很高.

摘要： 为了建立检测PCV2抗体的间接ELISA方法,本研究以猪圆环病毒2型(PCV2)重组Cap蛋白作为包被抗原,优化了反应条件及抗原、抗体工作浓度.结果显示,抗原最佳包被浓度为1μg/mL,待检血清的最佳稀释度为1∶80;最佳封闭液和抗体稀释液为含1％明胶、0.05％Tween-20的0.01M pH7.4PBS;当被检血清的OD450nm值≥0.3时为阳性,当OD值＜0.3时为阴性.该方法与猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、伪狂犬、猪流行性腹泻等病毒抗体无交叉反应,与免疫过氧化物酶单层试验的符合率为98.3％,批内与批间重复性试验的变异系数分别低于5％与8％.应用建立的方法检测了126份2013年采集的猪血清,PCV2抗体阳性率为40％～100％,表明河北省的猪群中PCV2感染率很高.

摘要： 本发明涉及PCV3Cap蛋白抗原表位肽、抗PCV3Cap蛋白的单克隆抗体及其制备方法和应用。本发明提供了抗PCV3Cap蛋白单克隆抗体，并进一步提供了单克隆抗体的重链可变区序列和轻链可变区的核苷酸和氨基酸序列，在此基础上，可以通过基因工程方式来制备抗体；同时，能够采用基因工程和蛋白质工程的方法，进行一个或多个氨基酸的添加、删除、替换等修饰，获得其活性片段或保守性变异体，为进一步提升抗体的特异性和亲和力奠定基础。该抗体具有较高特异性，与PCV1、PCV2及其他猪源病毒如CSFV、PRRSV、PRV等均无交叉反应，在抗原/抗体检测试剂盒、抗原/抗体免疫层析试纸、IFA、IPMA以及Western Blotting等免疫学检测中具有广泛的研究应用价值和商业使用价值。

摘要： 本发明涉及生物技术领域中的疫苗生产技术，具体涉及一种利用基因工程手段构建表达重组蛋白Pigpsa‑PCV2cap2的CHO细胞株、及其制备方法和应用。本发明所提供的重组融合蛋白Pigpsa‑PCV2cap2，为如下A1）或A2）：A1）氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的蛋白质；A2）在A1）的蛋白质的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基得到具有Pigpsa‑PCV2cap2活性的蛋白质。本发明获得的可以分泌表达Pigpsa‑PCV2cap2的单克隆细胞株，融合蛋白表达量较高，经His亲和分离纯化所获得融合蛋白能和单抗结合，免疫动物且生成中和抗体高于目前市面产品，其融合蛋白可用于猪圆环病毒预防疫苗，降低生产成本，避免内毒素残留引起死亡和免疫失败损失。

摘要： 本发明涉及一种猪圆环病毒2型Cap蛋白和胸腺素α1融合蛋白及应用，所述的融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:1。本发明的融合蛋白用于制备猪圆环病毒2型亚单位疫苗。本发明将筛选的猪圆环病毒2型Cap蛋白基因与具有免疫增强作用的胸腺素α1基因通过Lingker序列连接获得融合蛋白。本发明的基因工程亚单位疫苗免疫原性良好，可以高效的引起仔猪的免疫应答。

摘要： 本发明涉及PCV3Cap蛋白抗原表位肽、抗PCV3Cap蛋白的单克隆抗体及其制备方法和应用。本发明提供了抗PCV3Cap蛋白单克隆抗体，并进一步提供了单克隆抗体的重链可变区序列和轻链可变区的核苷酸和氨基酸序列，在此基础上，可以通过基因工程方式来制备抗体；同时，能够采用基因工程和蛋白质工程的方法，进行一个或多个氨基酸的添加、删除、替换等修饰，获得其活性片段或保守性变异体，为进一步提升抗体的特异性和亲和力奠定基础。该抗体具有较高特异性，与PCV1、PCV2及其他猪源病毒如CSFV、PRRSV、PRV等均无交叉反应，在抗原/抗体检测试剂盒、抗原/抗体免疫层析试纸、IFA、IPMA以及Western Blotting等免疫学检测中具有广泛的研究应用价值和商业使用价值。

摘要： 本发明属于基因工程技术领域，公开了一种PCV3 Cap蛋白抗原多肽、抗PCV3 Cap蛋白的多克隆抗体及其应用，所述PCV3 Cap蛋白抗原多肽序列为SEQ ID NO:1。PCV3 Cap蛋白多肽的设计及合成：根据GenBank上的PCV3 Cap蛋白序列获得PCV3 Cap蛋白序列，含有157个氨基酸；用DNAstar软件分析Cap蛋白特性，该蛋白的分子量为16871道尔顿，等电点为6.59，为酸性蛋白；用IEDB软件分析Cap蛋白免疫原性、亲疏水性及表面可及性，结果表明PCV3 Cap蛋白30aa‑45aa有16个氨基酸抗原性、亲水性及表面可及性较强；Cap抗原多肽筛选。

摘要： 本发明提供了一种高效表达PCV2 Cap、PCV3 Cap融合蛋白的方法，首先构建了一株高效表达PCV2Cap蛋白和PCV3Cap蛋白的重组杆状病毒：将截去核定位信号的PCV2Cap蛋白的核苷酸序列与PCV3Cap蛋白的核苷酸序连接，中间用一段疏水的柔性蛋白linker序列连接，在PCV2Cap蛋白和PCV3Cap蛋白序列的N端加入蜂素信号肽序列，促使其分泌表达。重组阳性杆状病毒感染sf9昆虫细胞表达的蛋白进行了多种翻译后修饰，接近于天然的病毒编码蛋白，具有较高的生物学活性，而且杆状病毒具有高度的种属特异性，仅感染昆虫细胞，对脊椎动物细胞无感染性，其表达产物安全可靠，经简单处理即可用于后续试验。因此，本发明的方法表达PCV2 Cap和PCV3 Cap融合蛋白，比传统方式更加安全有效。

摘要： 本发明公开了一种CHO细胞高效表达体系，所述的CHO细胞中含有CAG启动子基因‑人干扰素‑α2信号肽基因‑Luc基因的真核表达载体。本发明还公开了一种所述的CHO细胞高效表达体系的筛选方法，所述的方法包括以下步骤：启动子的筛选和信号肽的筛选。本发明还公开了一种所述的CHO细胞高效表达体系在PCV2Cap蛋白表达中的应用，所述的应用是将PCV2Cap蛋白基因替换所述的真核表达载体中的Luc基因。本发明所述的CHO细胞高效表达体系使用时，直接将目的蛋白基因替换Luc基因，即可实现目的蛋白在CHO细胞中稳定高效分泌表达，且使用我们的体系在PCV2Cap蛋白的表达中的应用很成功。

摘要： 本发明公开了表达猪瘟病毒E2蛋白和猪圆环病毒Cap蛋白的重组伪狂犬病病毒株及其构建方法和用途。本发明通过fosmid基因操纵系统，将PRV TJ株基因组TK和gE/gI基因部分缺失，将Cap与gG(US4)融合，在US9插入E2表达框，拯救表达猪瘟病毒E2蛋白和猪圆环病毒Cap蛋白的重组伪狂犬病病毒株，其在体外的复制和生长动力学与亲本病毒相当，外源基因的插入不影响重组病毒株的遗传稳定性；用该重组伪狂犬病毒株免疫猪，能诱导出较强的PRV特异性体液免疫应答，未显示出任何PRV特异性的临床症状。本发明所构建的重组伪狂犬病病毒株能用于制备预防伪狂犬病、猪瘟病或/和猪圆环病毒所导致疾病疫苗。

摘要： 本发明涉及生物技术领域中的疫苗生产技术，具体涉及一种利用基因工程手段构建表达重组蛋白Pigpsa‑PCV2cap2的CHO细胞株、及其制备方法和应用。本发明所提供的重组融合蛋白Pigpsa‑PCV2cap2，为如下A1）或A2）：A1）氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的蛋白质；A2）在A1）的蛋白质的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基得到具有Pigpsa‑PCV2cap2活性的蛋白质。本发明获得的可以分泌表达Pigpsa‑PCV2cap2的单克隆细胞株，融合蛋白表达量较高，经His亲和分离纯化所获得融合蛋白能和单抗结合，免疫动物且生成中和抗体高于目前市面产品，其融合蛋白可用于猪圆环病毒预防疫苗，降低生产成本，避免内毒素残留引起死亡和免疫失败损失。

摘要： 本发明公开了一种重组鸽圆环病毒Cap蛋白的杆状病毒系统表达及该蛋白的应用，属于基因工程技术领域。鸽圆环病毒Cap蛋白由该病毒Cap基因所编码，所述Cap基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示。表达重组鸽圆环Cap蛋白的方法包括：对包含鸽圆环病毒PiCV-zj1的全基因组核苷酸序列设计引物及鸽圆环病毒结构蛋白基因重组质粒为模板的反应体系进行PCR反应处理，得到含有鸽圆环病毒Cap基因的PCR产物；将所述PCR产物克隆到昆虫细胞杆状病毒系统中，得到用于表达重组鸽圆环病毒Cap蛋白的重组杆状病毒。本发明表达的重组Cap蛋白比原核表达产物更接近天然Cap蛋白，且表达效率高、用途广泛。