猪胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅱ基因的克隆、表达及其免疫原性

摘要

以本实验室分离的猪胸膜肺炎放线杆菌血清2型(Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 2,APP-2)菌株HB08的基因组为模板,扩增了2871 bp的APP毒素Ⅱ的结构基因apxⅡA,并克隆到pET-28a原核表达载体中构建重组表达质粒pET28aⅡA,转化到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),经SDS-PAGE和Westernblot分析表明,表达的重组蛋白具有良好的反应活性.将表达的蛋白经或不经复性处理,与纯化的天然毒素Ⅱ分别免疫昆明小鼠,同时设PBS空白对照组,每组12只,间隔2周免疫2次,采血检测其抗体效价,二免后2周用致死剂量的APP血清7型(APP-7)菌株(1.08× 108CFU(菌落形成单位,colony form unit)/只)腹腔攻击.结果显示,复性蛋白组的保护率为83.3%,非复性蛋白组的保护率为58.3%,天然毒素蛋白对照组保护率为91.7%,空白对照组小鼠全部死亡,说明复性的重组毒素Ⅱ具有良好的免疫原性.