以增加催化结构域的基因重构方法提高里氏木霉外切型葡聚糖酶Ⅱ的活性

摘要

通过两种增加催化结构域基因的方式对里氏木霉(Trichoderma reesei)QM9414外切型葡聚糖酶Ⅱ(CBHⅡ)编码基因(cbh2)进行重构.第一种重构方式是在cbh2基因的上游增加内切葡聚糖酶Ⅳ(EGⅣ)的催化结构域基因(cdE),第二种重构方式是在纤维素酶CBHⅡ编码基因的下游增加其自身的cdC基因.通过PCR和基因重构手段获得重组质粒pPICZαA-cdE-cbb2和pPICZαA-cbh2-cdC,并在毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115中表达,获得重组菌株P.pastoris PEC11和PCC16,在经改良的摇瓶培养条件下能表达具有较高CMCNa(sodium carboxymethyl cellulose)酶活性的融合蛋白,培养液的CMCNa活性分别达到3.87和7.66 U/mL,其中P.pastoris PCC16表达的重构酶活性是毕赤酵母表达的单一CBHⅡ酶活性的2倍.表明采用增加结构域的方式可以有效地提高纤维素酶的活性.