牛干扰素-tau基因的原核表达及生物功能鉴定

摘要

采用PCR方法直接从牛早期胚胎细胞中扩增牛干扰素-tau(bovine interferon-tau,bIFN-т)基因,并克隆到pGEM-T载体中.然后将含信号肽和不含信号肽的bIFN-т片段分别与原核表达载体pET-30a(+)连接.并用IPTG诱导表达.重组蛋白经Ni2+亲合层析纯化后,通过抗病毒检测和对靶细胞形态变化的影响检验其生物学功能.实验结果显示,以胚胎裂解液为模板、不提取胚胎基因组DNA,可以从少量(5枚)的牛囊胚中直接扩增出bIFN-т基因,与GenBank(XM-593584)序列相比,核苷酸和氨基酸的同源性分别为99%和97%;不含信号肽序列的重组质粒诱导表达后,经SDS-PAGE电泳检测发现约在20 kD处出现特异性蛋白条带,与目标蛋白分子量一致;纯化后重组蛋白的抗病毒活性单位为1×104IU/mg;在牛子宫内膜上皮细胞培养液中添加2.9ìg/mL纯化的rbIFN-т蛋白后24 h,细胞体积明显增大,细胞内出现囊泡状结构.表明实验获得了具有一定生物活性的rbIFN-т蛋白.