新疆北疆地区牛轮状病毒VP7 基因的克隆、原核表达及生物信息学分析

摘要

为了解新疆北疆地区牛轮状病毒VP7基因的结构与功能,参照GenBank中所收录的牛轮状病毒DQ株序列设计了一对特异性引物,利用生物信息学技术分析VP7蛋白基因的同源性、密码子偏爱性、信号肽、跨膜区、糖基化位点、磷酸化位点及二级结构等,利用RT-PCR扩增出1080bp的VP7全长基因,测序结果与参考的核苷酸同源性达到90%左右,克隆到pMD19-T载体中,获得pMD19-T-VP7阳性质粒。以阳性质粒为模板进行PCR鉴定,定向克隆到表达载体28a上,经酶切、PCR鉴定阳性质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG(终浓度为1.5mmol/mL)37℃诱导4—5h。结果表明,SDS-PAGE电泳显示表达了大小约40KD的带His标签的融合蛋白,经WesternBlot分析表达的VP7蛋白可与BRV阳性血清反应。VP7基因氨基酸密码子偏爱以G、C结尾的密码子;VP7蛋白可能存在4个糖基化位点,无信号肽,2个跨膜区,VP7蛋白二级结构预测,a-螺旋区域85个氨基酸占26.15%;β折叠区域91个氨基酸占28.00%;无规则卷区域149个氨基酸占45.85%。本研究结果对牛轮状病毒VP7基因相关信息进一步了解,为VP7蛋白作为诊断用抗原做了铺垫,对于诊断试剂以及疫苗的相关开发具有参考意义。