猪CD4基因编码区及其剪接体克隆与表达分析

摘要

白细胞分化抗原4(cluster of differentiation 4,CD4)是一种主要表达在CD4+细胞膜上的共受体和信号转导分子.CD4分子参与识别主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅱ类分子,在T淋巴细胞亚群的发育、分化以及CD4+细胞抗原识别过程中发挥重要功能.本研究旨在克隆猪(Sus scrofa)CD4基因及其剪接体编码区(coding sequence,CDS),并揭示CD4 mRNA在猪组织中的表达特征.根据猪CD4 mRNA序列(GenBank登录号:AY515292),利用反转录PCR (reverse transcription-PCR,RT-PCR)扩增大白猪CD4基因的编码区,并分析CD4基因选择性剪接在不同组织中的表达情况.同时,用荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)分析CD4 mRNA在大白猪不同组织中的表达谱,以及在大白猪、长白猪和松辽黑猪3个免疫组织中的表达量.结果显示,通过RT-PCR、克隆和测序,获得两种猪CD4编码序列(GenBank登录号:KC333253和KC333254),其中完整型(1 375 bp)和剪接型(1 252 bp) CD4分别编码457和397个氨基酸;两种CD4编码序列在猪外周血、胸腺、淋巴结和脾脏中均有表达,其中完整型CD4的表达量要高于剪接型.qRT-PCR结果表明,猪CD4基因在脾脏中的表达量显著高于肝脏、胃、肾脏、心脏和肌肉(P＜0.05);同一免疫组织的CD4 mRNA含量在大白猪、长白猪和松辽黑猪之间没有显著差异(P＞0.05),而3个猪种都是胸腺中的CD4基因表达量显著高于在脾脏和淋巴结中(P＜0.05).本研究为进一步探究猪CD4基因的结构和功能提供基础资料.