甲型流感病毒核蛋白基因的真核质粒的构建及其表达

摘要

目的 构建甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)核蛋白(nucleoprotein.NP)基因的真核表达载体,转染Hela细胞,并用甲型流感病毒检测试剂盒(Flu A Rapid Test Kit)检测其表达情况.方法 用特异引物从甲型流感病毒cDNA中采用PCR技术克隆出NP基因,将其插入到真核表达质粒pcDNA3.1(+).酶切、PCR、测序鉴定后,构建好的peDNA3.1(+)/NP用脂质体转染法转染到Hela细胞,通过甲型流感病毒检测试剂盒检测其蛋白表达.结果 克隆出一个核苷酸长度为1432bp的基因,和A/PR/8/34(H1N1)(GenBank/NCB,GI:8486129)有98%的同源性,转染Hela细胞后用甲型流感病毒检测试剂盒检测到24h、48h、72h细胞内外的蛋白表达.结论 成功构建甲型流感病A/PR/8/34(H1N1)核蛋白基因的真核表达质粒,为进一步研究理化因素对该基因的影响、基因的结构和功能打下良好的基础.