荧光定量PCR检测TRECs的标准品质粒和标准曲线的构建

摘要

目的 构建荧光定量PCR检测T细胞受体重排切除环(TRECs)的标准品质粒和标准曲线.方法 对TCRδ基因进行序列分析,设计一对引物和探针.提取正常人外周血单个核细胞中的DNA,经普通PCR扩增,产物纯化后与pUCM-T载体连接并转化入大肠杆菌DH5α,筛选得到重组成功的质粒.结果 重组质粒测序后显示目的片段序列正确,表明TRECs基因片段成功克隆.以103～107 copies/ml不同稀释水平的标准品进行荧光定量PCR扩增后,统计学分析显示标准品浓度的对数与Ct值之间存在良好的线性关系(r=-0.998,P＜0.01).结论 所构建的TRECs标准品特异性和线性关系较好.