不同浓度尿酸对人类髓核细胞生物学功能的影响

摘要

目的 探讨不同浓度尿酸对人类髓核细胞(HNPC)生物学功能的影响。方法 体外不同浓度尿酸条件下培养HNPC,采用CCK-8法检测不同浓度尿酸对HNPC的抑制率。分别采用不同浓度(0、100、200、400μmol/L)尿酸培养HNPC 1周或2周,TUNEL荧光评估HNPC凋亡水平,qRT-PCR及免疫组织化学染色检测HNPC细胞外基质Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达,Western blot法检测凋亡相关蛋白和自噬相关蛋白的表达。结果 随着尿酸浓度的增加,HNPC活力呈递减趋势。培养1周后,与尿酸0μmol/L比较,尿酸400μmol/L HNPC中凋亡细胞比例和切割型Caspase-3、Beclin1、微管相关蛋白轻链3(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ比值表达增高(P<0.05),而p62蛋白、Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖mRNA和蛋白表达降低(P<0.05);培养2周后,与尿酸0μmol/L比较,尿酸200μmol/L、尿酸400μmol/L上述指标改变均较显著(P<0.05)。结论 高浓度尿酸可以促进HNPC凋亡以及自噬,减少HNPC细胞外基质表达,进而加重椎间盘退变。