Cry2 A毒素抗独特型单链抗体库的构建

摘要

为了降低苏云金杆菌Cry2A毒素的免疫检测成本,开发廉价、无毒试剂盒,采用整体抗体免疫和噬菌体展示技术的路线,设计和构建了Cry2A抗独特型单链抗体库.以Protein A纯化的Cry2A兔多克隆抗体为免疫原,对雌性Balb/c系小鼠进行了免疫.在优化的包被原浓度下,用ELISA法测定小鼠血清效价及抗独特型抗体组分.选取效价最高的小鼠,取脾脏提取总RNA,RT-PCR法合成cDNA第一链.设计简并引物,利用PCR法扩增小鼠VH、Vκ基因,再用SOE-PCR法进行单链抗体基因的拼接.SOE-PCR产物和pIT2载体经双酶切后连接,电转入感受态E.Coli.TG1完成建库,并用多克隆噬菌体ELISA对抗体库与免疫原的结合能力进行了鉴定.结果表明,免疫鼠血清的效价在1:1.6×105到1:6.4×105倍之间.免疫鼠血清可对Cry2A与其兔多克隆抗体的结合最高可产生17.6％的抑制,证明Ab2β和Ab2γ型抗独特型抗体的存在.最终构建了库容为1.2×107的Cry2A抗独特型单链抗体库,该抗体库与免疫原的结合信号/背景比值为6.04.