表达CTGF shRNA的pBSHH1质粒载体的构建和鉴定

摘要

目的构建表达CTGFshRNA的pBSHH1重组真核表达载体,为获得最佳CTGF基因的siRNA序列和RNAi治疗肾小管间质纤维化提供实验基础。方法从CTGF基因中筛选出4个符合RNAi条件的片段,分别设计4对寡核苷酸,退火后形成双链,两端带有BglII和HindⅢ酶切位点,将上述4对寡核苷酸依次连入BglⅡ和HindⅢ双酶切后线形化的pBSHH1载体,构建成能在细胞内产生CTGFshRNA的质粒,依次命名为pBSHH1-T-1、2、3、4。酶切鉴定,测序证实。结果pBSHH1-T-1、2、3、4经限制性内切酶HindⅢ和EcoRI酶切,电泳后显示连接了双链DNA的280bp条带,进一步测序并证实重组质粒连接正确。结论成功构建了四个能在细胞内表达CTGFshRNA的pBSHH1质粒载体,为获得最佳的CTGF基因的siR-NA序列和进一步RNAi治疗肾小管间质纤维化奠定了基础。