Pgenesil-1质粒载体介导的表达ERCC1shRNA的质粒构建和鉴定

摘要

目的:设计构建Pgenesil-1质粒载体介导的表达ERCC1shRNA的重组体质粒。方法:以ERCC1为靶基因,以Pgenesil-1质粒为载体,设计构建重组体,根据ERCC1基因cDNA序列,设计有小发卡结构的2条寡核苷酸序列,克隆到空载体Pgenesil-1中,转化DH5а菌株,提取质粒,进行酶切鉴定和测序分析。结果:经酶切鉴定筛出的重组体测序结果和目的序列相同,重组体载体构建成功。结论:成功构建了能表达ERCC1shRNA的质粒载体Pgenesil-1/ERCC11和Pgenesil-1/ERCC12,为下一步研究ERCC1基因在卵巢癌细胞株顺铂耐药中的作用奠定了实验基础。