依泽替米贝对泡沫细胞胆固醇转运的影响

摘要

目的:建立一种新的诱导巨噬细胞泡沫化的模型,并用这个模型探讨依泽替米贝对泡沫细胞胆固醇转运的影响.方法:用不同浓度(0,5,10,15,25,35,45和55μg/mL)的Chol:MβCD孵育巨噬细胞株RAW264.7细胞72 h;并选用45μg/mLChol:MβCD孵育RAW264.7细胞0,12,24,48,60,72 h.进一步在加入Chol:MβCD的同时加入ezetimibe和阳性对照药物lovastatin孵育.用HPLC检测细胞内游离胆固醇和总胆固醇含量,油红O染色观察细胞荷脂情况,用Western印迹法检测SREBP-1和caveolin-1蛋白的表达.结果:细胞内游离胆固醇、总胆固醇含量随Chol:MβCD浓度的增加,孵育时间的延长,呈浓度和时间依赖性地升高,分别在45μg/mL和72 h时达到峰值.Chol:MβCD 45μg/mL处理RAW264.7细胞72 h和用经典方法50μg/mL ox-LDL处理48 h,比较二种方法细胞内游离胆固醇、总胆固醇含量以及油红O染色显示的细胞内荷脂的情况均无明显差别.在加入45μg/mL的Chol:MβCD处理RAW264.7细胞的同时加入不同浓度依泽替米贝(3,10,30μmol/L)以及阳性对照药lovastatin,结果显示依泽替米贝和lovastatin均能显著降低细胞内胆固醇水平,且依泽替米贝的这一作用有剂量依赖性.Western印迹结果显示,Chol:MβCD诱导的模型组SREBP-1和caveolin-1的表达增加,而依泽替米贝和lovastatin能够逆转这种效应,且依泽替米贝的这一作用呈剂量依赖性.结论:Chol:MβCD能诱导RAW264.7细胞转化成为泡沫细胞.依泽替米贝能抑制Chol:MβCD诱导RAW264.7细胞形成泡沫细胞,其机制可能与通过下调SREBP-1表达进而下调caveolin-1的表达,抑制胆固醇的摄取有关.