丹参酮ⅡA联合三氧化二砷对人白血病细胞株NB4体外凋亡、自噬的影响及其机制

摘要

目的 探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)联合三氧化二砷(ATO)对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4增殖、凋亡及自噬的影响及其可能的分子机制,为临床采用TanⅡA治疗或辅助治疗白血病策略提供实验和理论依据.方法 取对数生长期细胞进行实验,共分6组:4、8、16 mg·L-1 TanⅡA组,0.5 mg·L-1 ATO组,8 mg·L-1 TanⅡA+0.5 mg·L-1 ATO组,对照组加入9 g·L-1生理盐水.采用MTT法检测TanⅡA与ATO单药及两药联合对NB4细胞增殖的抑制作用.采用流式细胞术(FCM)检测各组NB4细胞的凋亡率和自噬率.采用蛋白质印迹法检测凋亡特异蛋白半胱天冬酶-3(Caspase-3)及自噬特异蛋白Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ的表达水平.结果 TanⅡA对NB4细胞增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖性.两药联合组对NB4细胞增殖的抑制率大于8 mg·L-1 TanⅡA组和0.5 mg·L-1 ATO组(均P<0.05).8 mg·L-1 TanⅡA作用于NB4细胞48 h后的凋亡率和自噬率分别为(11.28±3.32)％、(18.42±7.63)％,0.5 mg·L-1 ATO作用于NB4细胞48 h后凋亡率和自噬率分别为(32.69±5.60)％、(34.36±7.60)％,两药联合作用后细胞凋亡率和自噬率分别为(44.02±6.47)％、(53.26±7.39)％,高于单药组(均P<0.05).蛋白质印迹实验显示,TanⅡA联合ATO组NB4细胞中Caspase-3、Beclin-1、LC3-Ⅱ的相对表达量高于单药组和对照组(均P<0.05).结论 TanⅡA联合ATO有协同抑制NB4细胞增殖、诱导凋亡及促进自噬的作用,上调Caspase-3、Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的表达水平是其可能的分子机制.