HPLC-MS/MS测定人体血浆中克拉霉素浓度的方法及方法学确证

摘要

目的 建立测定人体血浆中克拉霉素浓度的高效液相色谱-串联质谱联法(HPLC-MS/MS)法.方法 血浆样本用甲醇沉淀蛋白后,选用色谱柱Agilent-XDB-C8柱(2.1 mm×150 mm,5 μm),以甲醇(A相):水(含0.1%甲酸)=85∶15(V∶V)的比例为流动相,流速为0.2 ml/min,选用岛津(SHIMADZU)高效液相色谱系统,串联API3200型三重四极杆质谱仪,采用多重反应监测(MRM)扫描方式进行监测,电喷雾离子化源(ESI源),正离子方式,用于定量分析的离子反应对分别为质荷比 m/z 748.4→m/z 158.2(克拉霉素)和 m/z 515.3→m/z 276.2(替米沙坦,内标).结果 本方法血浆中克拉霉素的线性范围为10～3 000 ng/ml(r>0.99),定量下限为10 ng/ml,批内和批间相对标准偏差均<15%,准确度(相对回收率) 相对标准偏差也均<15%.稳定性试验中,血浆中克拉霉素在方法学要求的各种贮存条件下均较稳定.结论 该方法快速、灵敏、专属性强、重现性好,适用于人体内克拉霉素的药代动力学研究.