重组体pshRNA-dnmt1对肝癌细胞dnmt1基因表达的抑制作用

摘要

目的 以DNA甲基转移酶1(dnmt1)为靶基因构建重组体pshRNA-dnmt1,研究其对肝癌SMMC-7721细胞株内dnmt1基因表达的抑制作用.方法 利用RNA干扰技术,构建靶向dnmt1的shRNA干扰重组体pshRNA-dnmt1,经测序鉴定后转染到肝癌SMMC-7721细胞株,用RT-PCR法检测dnmt1 mRNA水平,用Western-blot法检测dnmt1蛋白的表达.结果 转染后SMMC-7721细胞中dnmt1 PCR扩增带亮度及dnmt1蛋白杂交带亮度明显减弱,重组体pshRNA-dnmt1对肝癌细胞dnmt1基因的抑制率在转染后24 h、48 h、72 h分别为41.6％、63.0％、84.1％,对dnmt1蛋白的抑制率分别为48.2％、68.5％、81.5％.结论 重组体pshRNA-dnmt1能明显抑制肝癌SMMC-7721细胞株内dnmt1基因表达.