RNAi重组体抑制胃癌细胞AGS中DNMT1基因的表达

摘要

目的:利用RNA干扰(RNAinterfering,RNAi)技术,以DNMTI(DNAmethyltransferase1)为靶基因,设计构建重组体,研究其对胃癌细胞AGS中DNMTI表达的抑制作用,方法:设计有小发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,再克隆至载体pTZU6+1中构建重组体,经鉴定正确后,转染胃癌细胞AGS,最后使用RT-PCR法定性分析DNMT1的mRNA水平和Westernblot法分析DNMT1的蛋白表达水平.结果:成功地构建了靶向DNMT1基因RNAi的重组体,将其有效转染到胃癌细胞AGS中去后,出现了DNMT1的蛋白和mRNA水平的明显下降,转染后48h的相对抑制率为73%左右.结论:DNMT1靶向RNA干扰重组体转染到胃癌细胞中可抑制DNMT1的表达.