SASH1在人胃癌组织中的表达及RNAi抑制GES-1细胞中SASH1基因表达的研究

摘要

目的： SASH1基因(SAM-and SH3-domain containing 1)是新发现的一种候选抑癌基因，本课题研究SASH1蛋白在胃癌组织中的表达情况及构建SASH1小干扰RNA表达载体以抑制SASH1基因在GES-1细胞中的表达。 方法： 1、收集94例手术切除胃癌组织及15例癌旁组织，采用免疫组化方法检测SASH1蛋白表达情况，并分析SASH1表达与胃癌临床病理特征之间的关系； 2、设计SASH1基因的RNAi干扰靶点，并利用psilencer 1.0-U6质粒构建2个SASH1小干扰RNA表达载体，分别命名为pSilencer-1.0-U6-SASH1-1和pSilencer-1.0-U6-SASH1-2； 3、通过LipofectamineTM2000将重组质粒转染入胃粘膜上皮细胞GES-1中，用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)比较重组质粒转染后GES-1细胞增殖能力的改变，并用细胞免疫化学、RT-PCR检测转染前后SASH1基因表达的变化，同时比较了转染前后GES-1细胞BCL-2基因的表达变化情况。 结果： 1、胃癌组织中SASH1蛋白阳性表达率明显低于癌旁组织，两者差异有显著性(P=0.001)；SASH1在胃癌组织中的表达与浸润深度(P=0.001)、淋巴结转移(P<0.001)、分化程度(P=0.021)及TNM分期(P=0.047)有关，而与年龄(P=0.513)和性别(P=0.720)无关； 2、转染重组质粒pSilencer-1.0-U6-SASH1-1组的GES-1细胞72h、96h、120h用MTT法测得的增殖能力比对照组和pSilencer-1.0-U6-SASH1-2实验组强(P<0.05)； 3、转染重组质粒pSilencer-1.0-U6-SASH1-1组的GES-1细胞内的SASH1基因的mRNA及蛋白表达水平下降，BCL-2基因的表达水平升高。 结论： 1、SASH1蛋白表达水平与胃癌临床病理特征密切相关； 2、重组质粒pSilencer-1.0-U6-SASH1-1可以有效抑制GES-1细胞内的SASH1基因表达； 3、应用RNAi技术抑制GES-1细胞内的SASH1基因表达后会促进GES-1细胞增殖； 4、抑制GES-1细胞内的SASH1基因表达后GES-1细胞内的BCL-2表达水平升高，提示SASH1表达水平下调后可能通过BCL-2发挥一系列的生物学作用。

目录

声明

摘要

前言

第1章SASHl基因在胃癌组织中的表达

第2章设计SASH1小干扰RNA表达载体

第3章构建SASH1小干扰RNA表达载体

第4章SASH1小干扰RNA表达载体对胃粘膜上皮细胞GES-1体外干预实验

第5章讨论

第6章结论

参考文献

致谢

综述 候选抑癌基因SASH1的研究进展