血管紧张素Ⅱ1型受体亚型鉴别的RNAi应用研究

摘要

目的 针对小鼠血管紧张素Ⅱ1型受体(Angiotensin Ⅱ Receptor 1,AT1R)两亚型之间无工具药区分的现状,研究应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术来区分两种亚型受体功能的可行性.方法 选择雄性C57BL小鼠作为动物模型,通过在脑干孤束核(nucleus tractus solitarius,NTS)注射携带短发夹RNA(short hairpinRNA,shRNA)腺病毒的方法,喂养10 d后取出脑干组织做标本,使用原位杂交的方法检测每只小鼠脑干NTS部位AT1R mRNA两种亚型的表达情况,同时使用免疫组织化学的方法显示受体蛋白表达的情况.结果 注入携带针对AT1aR mRNA的shRNA腺病毒后,AT1ab mRNA的表达降低了(61.2±6.8)%(P<0.01),AT1bR mRNA的表达则不受影响(P>0.05);改用AT1bR mRNA相应的shRNA腺病毒,AT1bR mRNA的表达降低了(51.6±5.2)%(P<0.01),AT1aR mRNA的表达基本不受影响(P>0.05).用免疫组织化学显示AT1R蛋白表达情况,发现两种情况下表达均出现不同程度的下降.结论 所设计的针对不同亚型AT1R的shRNA,可以特异地沉默各自不同受体的mRNA表达,并同时在蛋白水平上显示出AT1R受到抑制的结果,故可以将其应用于区别AT1R两种亚型受体功能的研究.