A型流感病毒核衣壳蛋白ELISA捕获法的建立和临床应用

摘要

目的 制备和鉴定A型流感病毒核衣壳蛋白单克隆抗体,建立A型流感病毒核衣壳蛋白ELISA捕获法,用于A型流感病毒感染的实验室早期诊断.方法 利用杆状病毒系统表达A型流感病毒核衣壳蛋白,免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,采用ELISA间接法、免疫荧光和免疫印迹进行筛选和鉴定,用双抗体夹心ELISA捕获法建立检测A型流感病毒核衣壳蛋白的方法 .结果 获得8株、共识别4个A型流感病毒核衣壳蛋白不同抗原位点的单克隆抗体,选择以单抗2B8A11作为捕获抗体,以C16A15作为检测抗体为最佳抗体对,建立双抗体夹心ELISA捕获法.检测流感患者的当日采集和冻存的呼吸道标本,与病毒分离培养方法 的符合率分别为100%和42.9%;与B型流感病毒和其他呼吸道病毒无交叉反应.检测流感患者当日采集的呼吸道标本敏感性高于德国Serion试剂盒(P<0.001),与RT-PCR方法 比较差异无显著性(P=0.5).结论 成功建立了灵敏度高、特异性强的A型流感病毒核衣壳蛋白抗原的ELISA捕获法,为A型流感病毒感染的实验室早期诊断提供技术方法 .