草鱼呼肠孤病毒抗原捕获ELISA检测方法的建立

摘要

研究以纯化的羊抗草鱼呼肠孤病毒多克隆抗体作为捕获抗体,抗草鱼呼肠孤病毒的单克隆抗体为检测抗体,建立草鱼呼肠孤病毒抗原捕获ELISA检测方法,其最佳反应条件是:羊多克隆抗体包埋浓度为2.5μg/mL,抗草鱼呼肠孤病毒单克隆抗体工作浓度为1∶400稀释,以3％牛血清白蛋白作为封闭液.该方法的检测限为5×105pfu/mL,且能够特异性检出发病草鱼内脏组织中的草鱼呼肠孤病毒.特异性试验结果表明该方法具有较高的特异性,与病毒性出血性败血症病毒、传染性造血器官坏死病毒和鲤春血症病毒等水产动物病毒株均不反应.该方法还具有较好的稳定性.