体外条件下蜕皮甾酮对大鼠脐带间充质干细胞增殖的实验研究

摘要

目的 研究体外条件下蜕皮甾酮(ecdysterone,EDS)对于大鼠脐带间充质干细胞增殖活性的影响.方法 采用胶原酶消化法分离培养大鼠脐带间充质干细胞,并通过动态观察细胞形态,流式细胞术检测细胞表面抗原加以鉴定;取第3代脐带间充质干细胞分别在基础培养基(DMEM-LG培养基、10%的胎牛血清、100 U/mL青/链霉素、2 mmol/L L-谷氨酰胺)中加入不同浓度(0、25、50、100、150、200 μg/mL)EDS予以干预,分别于第1、3、5、7天用MTT法检测细胞增殖活性;另外,设置相同分组EDS干预培养大鼠脐带间充质干细胞7 d,绘制细胞生长曲线.结果 采用酶消化法能有效分离纯化大鼠脐带间充质干细胞.细胞流式仪鉴定显示,第3代脐带间充质干细胞阳性表达CD44和CD90,阴性表达CD34和CD45.MTT法检测结果显示经EDS干预培养的大鼠脐带间充质干细胞生长状态良好,在细胞活力方面与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),EDS 100、150及200 μg/mL 3组细胞活性比较差异无统计学意义(P＞0.05).细胞生长曲线同样显示EDS实验组可有效促进脐带间充质干细胞的增殖,缩短细胞倍增时间,此作用在EDS浓度为100 μg/mL时达到最佳.结论 体外条件下,EDS对大鼠脐带间充质干细胞具有促增殖作用,在EDS浓度为100 μg/mL时较为显著,不再随浓度的增加而增强.这有望成为促进脐带间充质干细胞增殖的新方法.