难转染悬浮细胞 OCI -LY8慢病毒过表达稳定细胞株的构建

摘要

目的：探讨难转染悬浮细胞慢病毒过表达稳定细胞株的构建方法。方法选用人弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）细胞株OCI-LY8为研究对象，分别用Fbw7基因的慢病毒原液、慢病毒浓缩液、慢病毒浓缩液加入终浓度为5μg/mL的1，5-二甲基-1，5-二氮十一亚甲基聚甲溴化物（polybrene）、慢病毒浓缩液加入终浓度为10μg/mL的polybrene 4种方式进行感染。因慢病毒载体含有绿色荧光蛋白报告基因，故通过倒置荧光显微镜观察细胞内荧光的数量及强度来评判上述4种方式的感染效率，并用Real-time PCR和Western blot进行验证。结果慢病毒原液的感染效率极低，仅在少许细胞中看到极微弱的荧光；慢病毒浓缩液的感染效率尚可，约有60％的细胞可以观察到微弱的荧光；慢病毒浓缩液中加入5μg/mL polybrene的感染效率较高，约90％的细胞可以观察到较强的荧光；慢病毒浓缩液中加入10μg/mL polybrene的感染效率极高，几乎全部细胞均可以观察到很强的荧光。结论慢病毒浓缩液中加入合适浓度的polybrene是感染DLBCL细胞株OCI-LY8较为有效的方法。慢病毒的感染效率与细胞的状态、感染复数、polybrene的浓度密切相关。