人参皂苷Rb1对低氧加无血清培养诱导的大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响

摘要

目的：探讨人参皂苷Rb1对低氧／无血清培养诱导的大鼠骨髓间充质干细胞（ rBMSCs）凋亡的作用。方法 MTT法检测浓度范围在0．1～1000μg／L的人参皂苷Rb1对rBMSCs增殖的影响。将细胞培养液更换为低氧预处理的不含血清的培养液，置1％O2、5％CO2、37℃三气培养箱中培养24 h建立细胞凋亡实验模型。实验分为C组、H／SD组和Rb1－L组、Rb1－M组、Rb1－H组。 C组和H／SD组分别为常氧和低氧血清剥夺处理，不加Rb1，Rb1－L组、Rb－M组、Rb1－H组在H／SD处理的同时，培养液中依次加10、100、1000μg／L Rb1。 Annexin V－FITC／PI染色，荧光显微镜下观察细胞凋亡情况，罗丹明123＋Hoechst 33342染色观察线粒体膜电位改变，分光光度法检测Caspase－3酶活力，qRT－PCR检测Bcl－2家族基因表达水平。结果 Rb1浓度范围在10～1000μg／L有促细胞增殖作用。与C组比较，H／SD组细胞凋亡率、Caspase－3酶活性均升高，线粒体膜电位明显降低， Bcl－2 mRNA表达水平下降，Bax mRNA表达水平升高，差异有统计学意义（P＜0.01），Bcl－2／Bax比值为0.32。与H／SD组比较，Rb1－L、Rb1－M和Rb1－H组细胞凋亡率及Caspase－3酶活力均降低，线粒体膜电位有不同程度恢复，Bcl－2 mRNA表达水平升高，Bax mRNA表达水平降低， Bcl－2／Bax比值均升高，差异有统计学意义（ P＜0.05，P＜0.01）。各项指标在Rb1各组组间差异无统计学意义（P＞0.05），但反应强度H组＞M组＞L组。结论人参皂苷Rb1对低氧加无血清培养诱导的rBMSCs 凋亡有保护作用，其浓度以1 mg／L 为最佳。