鳜鱼TCRα基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

摘要

根据GeneBank上鳜鱼TCRα基因序列设计并合成特异性引物,以鳜鱼β-actin基因为内参,采用RT-PCR方法从鳜鱼的胸腺总RNA中扩增得到鳜鱼TCRα和β-ctin基因,将目的片段纯化后克隆到PMD 18-T载体上,测序鉴定.以阳性质粒为标准品,采用SYBR GreenⅡ染料法进行实时荧光定量PCR扩增,构建标准曲线并进行溶解曲线分析.结果表明,鳜鱼TCRα基因的Ct值与标准品稀释度在102～108拷贝/μL范围呈良好的线性关系,产达0.99以上,溶解曲线分析表明产物为特异的单峰.