鸡IL-1β和IL-2及IL-6基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

摘要

为了建立荧光定量PCR检测鸡IL-1β，IL-2及IL-6基因的方法，根据Gen?ank上IL-1β，IL-2，IL-6的基因序列，在保守区设计并合成各自特异引物，选择β-actin和GAPDH为内参，采用SYBRGreen I染料法，以常规PCR产物为标准品，建立标准曲线，并进行熔解曲线分析。结果表明，各基因标准曲线Ct值检测范围在12-33左右，有良好的线性关系，r2均大于0.990。熔解曲线分析表明，产物为特异的单峰。本实验建立的鸡IL-1β，IL-2及IL-6基因实时荧光定量RT-PCR方法灵敏度高、特异性强、检测周期短，为从mRNA水平对鸡IL进行定量分析奠定了基础。