CKIP-1基因过表达慢病毒载体的构建及其在人前列腺增生细胞系BPH-1细胞中的表达

摘要

目的:构建酪蛋白激酶2相互作用蛋白1(CKIP-1)基因慢病毒过表达载体,检测其在人前列腺增生细胞系BPH-1中的表达.方法:用In-Fusion技术将CKIP-1基因亚克隆到真核细胞表达载体(pLenti CMV Puro Empty).限制性内切酶对载体进行酶切并回收线性载体片段,PCR扩增CKIP-1基因,In-Fusion技术进行融合得到pLenti CMV-CKIP-1.将构建成功的过表达质粒和慢病毒的两种辅助包装质粒PMD2G、PAPSX2共转染239T细胞,Western blot检测BPH-1细胞中CKIP-1蛋白的表达.结果:测序结果和Western blot检测均证明CKIP-1过表达慢病毒质粒构建成功,且在BPH-1细胞系中成功过表达.结论:成功构建了过表达CKIP-1基因的慢病毒质粒,且筛选到过表达CKIP-1的BPH-1稳转细胞系,为后续的实验奠定基础.