CRISPR/Cas9技术敲除杨树DCL1基因表达载体的构建

摘要

以 84K 杨为材料,扩增其基因组 DNA 第 1 个外显子序列,设计 2 个 gRNA 靶点,利用酶切连接 方法将其连入 sgRNA 克隆框,利用巢式 PCR 技术扩增获得包含 2 个靶点的表达盒扩增产物,进一步使用 Bsa I 内切酶线性化 pYLCRISPR/Cas9-DH 载体,并使用 T4 DNA 连接酶连入表达盒扩增产物,成功构建杨树 DCL1 基因编辑载体 pYLCRISPR/Cas9-DH–PtDCL1。