炭疽菌侵染后刺葡萄果皮酵母双杂交cDNA文库构建

摘要

[目的]炭疽病是南方葡萄的重要病害,刺葡萄是高抗炭疽病的重要野生葡萄资源,目前尚未见到关于葡萄炭疽菌侵染后的葡萄果皮酵母cDNA文库的报道.本文构建了葡萄炭疽菌侵染后刺葡萄果皮的酵母cDNA文库,为葡萄抗炭疽病分子机理研究提供材料基础.[方法]提取葡萄炭疽菌侵染后1、3、7d的刺葡萄福安果皮总RNA,采用SMART的方法将总RNA反转录合成cDNA,使用试剂盒将cDNA纯化,随后将纯化产物(双链cDNA)酶切处理及短片段去除,获得质量良好的cDNA.将其克隆到pGADT7三框质粒载体,经纯化精制,获得初级cDNA文库.对初级cDNA文库扩增后,提取文库质粒转化到Y187酵母菌中,制作扩增的酵母文库,并对酵母文库进行鉴定.[结果]经检测所构建的初级cDNA文库库容约为5.2×106 cfu,重组率约为97.92％,插入的片段长度主要分布在400～2000 bp,具有良好的多态性.进一步获得的Y187酵母文库滴度约为6.0×107 cfu·mL-1.[结论]构建的葡萄炭疽菌诱导的刺葡萄果皮酵母cDNA文库质量符合酵母双杂交筛选要求,为筛选葡萄炭疽病侵染过程中的互作蛋白奠定基础.