鸭三种病毒性疾病多重PCR检测方法的建立及初步应用

摘要

为了一次性检测临床样品中是否存在鸭新城疫病毒(NDV)、鸭瘟病毒(DPV)或鸭坦布苏病毒(DTMUV)感染,本研究根据GenBank已登录的3种病原的保守基因序列,分别设计了3对特异性引物,通过优化扩增条件,建立了可同时检测NDV、DPV和DTMUV的多重PCR检测方法.特异性检验表明,该多重PCR方法可同时扩增出NDV (510 bp)、DPV (400 bp)、DTMUV (300 bp)的特异片段,对其他鸭常感染病毒扩增结果均为阴性;敏感性测定表明,该多重PCR技术最低能检出1.02×10 4拷贝·μL-1 NDV、3.50×10 3拷贝·μL-1 DPV和1.17×10 4拷贝·μL-1 DTMUV.采用建立的多重PCR方法对250份临床样品进行检测结果显示,其检测结果与该3种病毒的常规单一PCR检测结果符合率为100％.以上结果表明,本研究建立的多重PCR检测方法具有快速、特异性强、敏感性高等优点,适用于临床样品中上述3种病原的检测.