一步法逆转录荧光定量PCR检测食源性沙门氏菌

摘要

建立采用一步法逆转录荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测食源性沙门氏菌的检测方法并初步应用.以沙门氏菌的invA基因为目的基因设计引物,优化PCR反应体系和反应条件,同时进行特异性、灵敏度和重复性实验；并用所建立的方法检测人工污染的猪肉样品,通过与传统计数方法的结果对比验证所建立方法的适用性.优化后的逆转录荧光定量PCR检测条件为:42℃、5min,95℃、10s,95℃、5s,67℃、34s;此步骤进行40个循环；上、下游引物的最佳终浓度均为0.16μmol/L.结果表明:该方法的特异性为100％;重复性良好；对沙门氏菌的检测下限为150CFU/mL;检测人工污染食品样品的结果100％符合传统计数结果.建立的检测方法具有快速、灵敏、简单等特点,非常适用于食源性沙门氏菌的检测.