粗壮脉纹孢菌原生质体的制备、再生及转化的条件

摘要

为建立原生质体介导的粗壮脉纹孢菌遗传转化系统,本研究主要考察了复合酶解液、菌龄及酶解时间对粗壮脉纹胞菌原生质体生成及再生的影响.结果表明,粗壮脉纹胞菌孢子悬液接种在马铃薯葡萄糖琼脂(potato dextrose agar,PDA)液体培养基中,30℃条件下摇床培养10h的菌丝,采用0.5 g/100mL蜗牛酶+0.5 g/100 mL溶壁酶+1 g/100 mL纤维素酶的复合酶解液、30℃条件下酶解10h,粗壮脉纹胞菌原生质体生成及再生最为适合.在此条件下,原生质体生成数可达4.53×106个,38#-再生培养基中的再生数可达1.41×106个,再生率达31.71％,聚乙二醇介导PAKHB载体转化NC原生质体,每微克质粒可获得8个以上的转化子.