1株古细菌海藻糖合成酶系在枯草芽孢杆菌中的诱导表达

摘要

来源于古细菌嗜酸硫化叶菌(Sulfolobus acidocaldarius)的麦芽寡糖基海藻糖合成酶(maltooligosylterhalose synthase,MTSase)和麦芽寡糖基海藻糖水解酶(maltooligosyltrehalose trehalohydrolase,MTHase)联合作用,可以利用淀粉为底物生成海藻糖.本研究构建了6种枯草芽孢杆菌-大肠杆菌穿梭表达载体,将密码子优化后的MTSase和MTHase编码基因在木糖异构酶基因的启动子及其阻遏蛋白介导下实现了在枯草芽孢杆菌中的功能表达,木糖启动子分别来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis).在以5 g/L甘油为碳源,24 g/L蛋白胨为氮源时,菌体培养8h后加入终质量浓度为6g/L的木糖,37℃诱导16h后重组MTSase、MTHase产生联合作用,海藻糖转化率达到33.57％.实现了MTSase、MTHase在枯草芽孢杆菌中的功能表达.