抗孔雀石绿单链抗体-碱性磷酸酶融合达和活性鉴定

摘要

采用重叠延伸的方法成功将抗孔雀石绿(malachite green,MG)单克隆细胞的轻链VL和重链VH用连接肽(Gly4Ser)3连接,形成单链抗体(single chain variable fragment,scFv)基因,并将其酶切连接进入含有碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,PhoA)基因的载体plip6/GN中,成功构建重组质粒plip6/GN-MG-scFv.随后重组质粒转入大肠杆菌BL21,经诱导表达后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blotting鉴定结果表明所获得的融合蛋白scFv-PhoA大小约72 kD.利用scFv与MG特异性结合的活性和PhoA催化对硝基苯磷酸二钠的显色机制,经过直接竞争酶联免疫吸附法测定融合蛋白scFv-PhoA的IC50为9.81 ng/mL.本方法操作简单、灵敏度高且检测时间短,这为进一步进行MG免疫法快速检测提供了参考.